A tecnologia do DNA recombinante, permite combinar na mesma molécula de DNA genes provenientes de fontes diferentes, mas não necessariamente de espécies diferentes, dando origem a uma molécula de DNA recombinante (DNAr).
Esta tecnologia baseia-se na utilização de ferramentas moleculares como as enzimas de restrição, as ligases do DNA e os vectores.
As enzimas de restrição reconhecem determinadas sequências de DNA e cortam a molécula nesses locais. As zonas de restrição correspondem a sequências de DNA curtas e simétricas que se lêem da mesma forma nas duas cadeias na direcção 5'-3'. Os fragmentos obtidos são então incorporados num vector, isto é, numa molécula capaz de transportar o fragmento de DNA para uma célula. Os bacteriófagos e os plasmídeos são dois exemplos de vectores utilizados na tecnologia do DNA recombinante.
Para que o fragmento de DNA estranho seja incorporado no vector, é necessário que a mesma enzima de restrição que actuo sobre esse DNA actue sobre o vector, de forma a expor uma sequência nucleótida complementar. Os dois segmentos de DNA ligados por acção da enzima DNA ligase produzindo uma nova molécula estável - DNA recombinante.
( http://biohelp.blogs.sapo.pt/2575.html )
( Silva_etal 2009 )
Inserção de DNA estranho num Plasmídeo
Processo de obtenção e expressão de uma molécula de DNAr:
1 - Selecciona-se uma molécula de DNA dadora, contendo o gene com interesse que se pretende transferir e clonar, e um vector adequado.
2 -A molécula de DNA e o vector são tratados com a mesma enzima de restrição, que corta as duas moléculas em regiões com a mesma sequência de nucleótidos.
3 - Misturam-se os fragmentos de restrição da molécula de DNA e o vector e juntam-se ligases do DNA. O vector e os fragmentos de restrição emparelham pelas extremidades coesivas, que são complementares, e a ligase estabelece a ligação.
4 - O vector, contendo o DNA dador, é transferido para uma célula ou organismo receptor.
5 - O DNA dador é incorporado no genoma da célula ou organismo receptor, que passa a possuir um DNA recombinante.
6 - Um meio selectivo ou testes químicos permitem identificar as células que exprimem o gene desejado. No processo descrito formam-se fragmentos de restrição que não têm o gene desejado e nem todas as células receptoras incorporam o DNA dador.
( http://biohelp.blogs.sapo.pt/2575.html )
http://www.sobiologia.com.br/conteudos/Biotecnologia/recombinante.php
As aplicações do DNA recombinante:
- Processos de cicstrização de feridas
- Cancro
- Hemofilia
- Hepatite B
- Despiste da SIDA
- Anemia
- Insulina